Técnicas macroscópicas coproparasitoscópicas "Tamizado"

Se fundamenta en el fenómeno de la filtración, utilizando tamices de diferentes diámetros en donde quedan atrapados los parásitos (trematodos, cestodos, nematodos). Esta técnica permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados de los metazoarios.

Material y equipo

• Coladera de tamiz fino
• Abatelenguas
• Caja petri
• Pinzas

Procedimiento

1. Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2. Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo mas limpio posible.

3. Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4. Los parásitos encontrados colocarlos en una caja petri con solución salina.

5. Se identifica la parte del parásito o el parásito completo.

6. Se reporta el género y especie del parásito o parte del parásito.

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

Introducción

Éste método está recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.
Los huevos y quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido.

Material y reactivos

• Vaso de precipitado
• Embudo
• Gasa
• Tubo de ensaye 
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Solución saturada de NaCl
• Solución de Yodo-Lugol

Procedimiento

1. Tomar aproximadamente 1 gr. de heces fecales con el abatelenguas.
2. Colocar la mezcla en un vaso de precipitados y mezclar con 10 ml de solución saturada de cloruro de sodio.
3. En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.
4. Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de manera que el líquido haga contacto con el cubreobjetos.
5. Esperar de 5 a 10 minutos.
6. Los quistes o huevos flotarán y quedarán adheridos a la cara del cubreobjetos que está en contacto con la muestra.
7. Colocar una gota de Yodo-Lugol sobre un portaobjetos, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar pérdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.
8. Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40X, buscando quistes o huevec.illos de parásitos.

Método de concentración por sedimentación RItchie

FUNDAMENTO: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL Y EQUIPO:
- Centrífuga
- Tubos de ensayo cónicos de 15 ml.
- Gasa cortada en cuadros
- Embudos de polietileno
- Vasos de precipitado de 50 ml.
- Aplicadores de madera
- Pipetas Pasteur con bulbo
- Portaobjetos de 26 X 76 mm.
- Cubreobjetos de 22 X 22 mm.
- Microscopio
- Solución salina isotónica
- Solución de formaldehido al 10%
- Éter

MÉTODO: 
1. Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de
 precipitado, se añaden 10 ml. de solución salina y se homogeniza.
2. Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3. Se centrifuga la suspensión durante 2min a 2000 rpm.
4. Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más.
5. Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
6. Se añaden después 5 ml. de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos
7. Se centrifuga durante 2 min a 2000 rpm.
8. Después de centrifugar se observan 4 capas:
- éter en la superficial
- un tapón de restos fecales
- formaldehido
- sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios
9. Se decanta el sobrenadante.
10. Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
11. Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.
12. Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

Método de concentración - flotación de Faust

- Fundamento:

Éste método utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necátor 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

- Materiales y reactivos:

· Vaso de precipitados

· Tubos de ensaye

· Embudo de cristal

· Gradilla

· Gasa estéril

· Aplicador de madera

· Abatelenguas

· Asa de platino

· Mechero de Bunsen

· Portaobjetos y cubreobjetos

· Solución de Sulfato de Zinc

·Solución Yodo Lugol

- Técnica:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua

destilada.

2. Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en 4, sobre un tubo de ensaye, audándose con un embudo pequeño.

3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 minuto.

4. Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.  Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.

6. Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento.

7. Centrifugar durante  minuto a 1500 rpm.

8. Tomar de 3-4 gotas de las partículas que floten en la superfcie del líquido.

9. Colocarlos en un portaobjetos y mezclarlos con 1-2 gotas de lugol, colocar el cubreobjetos

Método de concentración - flotación de Faust

- Fundamento:
Éste método utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necátor 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

- Materiales y reactivos:
· Vaso de precipitados
· Tubos de ensaye
· Embudo de cristal
· Gradilla
· Gasa estéril
· Aplicador de madera
· Abatelenguas
· Asa de platino
· Mechero de Bunsen
· Portaobjetos y cubreobjetos
· Solución de Sulfato de Zinc
·Solución Yodo Lugol

- Técnica:
1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2. Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en 4, sobre un tubo de ensaye, audándose con un embudo pequeño.

3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 minuto.

4. Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.  Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.


6. Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento.

7. Centrifugar durante  minuto a 1500 rpm.


8. Tomar de 3-4 gotas de las partículas que floten en la superfcie del líquido.

9. Colocarlos en un portaobjetos y mezclarlos con 1-2 gotas de lugol, colocar el cubreobjetos.

MÉTODO C.P.S. DIRECTO O EN FRESCO

I.- INTRODUCCIÓN
Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Antoni Van Leeuwenhoek y a mediados del siglo XVII fue el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoitos de Giardia lamblia.
El método que necesita menos equipo y el más sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces frescas o no preservadas, los exámenes ordinarios se hacen con solución salina isotódica y lugol. Si se emplean heces preservadas, el formol sirve de diluyente.
Las preparaciones no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos; como trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos. El lugol se enplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas, con base a sus características.
La mezcla normal en el tracto intestinal por lo general no asegura una distribución uniforme de trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos. Sin embargo el examen de materia fecal directo o en fresco puede revelar o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la infección.

II.- FUNDAMENTO
La solución salina isotónica da las condiciones adecuadas para que la célula se mantenga viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que puede encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo, es la solución salina fisiológica, y el lugol en la práctica ha demostrado su eficacia para la tinción e identificación de parásitos intestinales.

III.- MATERIAL
-Muestra fecal
-Aplicadores de madera
-Portaobjetos de 25 X 76 mm.
-Cubreobjetos
-Solución salina isotónica
-Lugol parasitológico

IV.- TÉCNICA
-En un portaojetos colocar una gota de solución salina isotónica.
-Con la punta del aplicador tomar una pequeña muestra de aproximadamente 1 a 4 mg. de heces, en muestras con moco y sangre elegir ésta parte para estudiar.
-Mezclar, procurando hacer una suspensión en preparación delgada y no un frotis.
-Quitar de la suspensión fibras y otros fragmentos grandes.
-Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar buebujas.
-Examinar al microscopio en forma sistemática, a seco débil y a aeco fuerte.
-Repetir la operación con una gota de lugol en lugar de la solución salina.

     FORMA DE REPORTAR
Primero se escribe la fase o estado y enseguida el nombre del parásito, con el genérico iniciando con mayúscula y el específico con minúscula, subrayándolo o escribiéndolo con otro tipo de letra.
Por ejemplo:
Huevos de Ascaris lumbricoides.

V.- VENTAJAS Y DESVENTAJAS
A) Ventajas
- La sencillez y rapidez para llevar a cabo éste método, además de la economía en su realización.
-Ambos tipos de montaje se pueden preparar en un mismo portaobjetos.
-Ésta técnica es la más útil para encontrar los trofozoitos de amibas y flagelados.
-Permite observar la movilidad de los organismos, la cual con mucha frecuencia es característica y sirve para hacer identificación exacta.
B) Desventajas.
-Las preparaciones con lugol, pueden destruir las formas sensibles como los trofozoitos.
-La muestra utilizada es tan pequeña que es poco representativa.

VI.- PRECAUCIONES.
-Una preparación satisfactoria debe tener densidad ligeramente opaca, pero ser lo bastante delgada para permitir leer las letras a través de ésta.
-Se deben ver perfectamente los elementos en la preparación, sin que se dificulte la observación por el exceso de burbujas y detritos microscópicos.
-En heces líquidas y semilíquidas hay que seleccionar el moco sanguinolento o los esfácelos delgados del tejido y en heces formadas, hacer raspados para obtener material de la superficie en varias partes de la masa fecal.
-Utilizar intensidad lumínica baja.
-Examinar por lo menos tres muestras antes de considerar negativos los resultados.
-La materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se deberá tener los cuidados necesarios para su manejo.

OBSERVACIONES.
Éstos fue lo que observamos:
-En la muestra 1 (yodo): Fibras vegetales, almidón y bacilos.
-Muestra 1 (solución salina): Fibras transparentes.
-Muestra 2 (yodo): Fibras vegetales.
-Muestra 2 (solución salina): Fibras musculares digeridas y no digeridas, además de restos de fibras de carne.