Método de concentración - flotación de Faust

- Fundamento:

Éste método utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necátor 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

- Materiales y reactivos:

· Vaso de precipitados

· Tubos de ensaye

· Embudo de cristal

· Gradilla

· Gasa estéril

· Aplicador de madera

· Abatelenguas

· Asa de platino

· Mechero de Bunsen

· Portaobjetos y cubreobjetos

· Solución de Sulfato de Zinc

·Solución Yodo Lugol

- Técnica:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua

destilada.

2. Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en 4, sobre un tubo de ensaye, audándose con un embudo pequeño.

3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 minuto.

4. Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.  Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.

6. Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento.

7. Centrifugar durante  minuto a 1500 rpm.

8. Tomar de 3-4 gotas de las partículas que floten en la superfcie del líquido.

9. Colocarlos en un portaobjetos y mezclarlos con 1-2 gotas de lugol, colocar el cubreobjetos

Método de concentración - flotación de Faust

- Fundamento:
Éste método utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necátor 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

- Materiales y reactivos:
· Vaso de precipitados
· Tubos de ensaye
· Embudo de cristal
· Gradilla
· Gasa estéril
· Aplicador de madera
· Abatelenguas
· Asa de platino
· Mechero de Bunsen
· Portaobjetos y cubreobjetos
· Solución de Sulfato de Zinc
·Solución Yodo Lugol

- Técnica:
1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2. Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en 4, sobre un tubo de ensaye, audándose con un embudo pequeño.

3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 minuto.

4. Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.  Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.


6. Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento.

7. Centrifugar durante  minuto a 1500 rpm.


8. Tomar de 3-4 gotas de las partículas que floten en la superfcie del líquido.

9. Colocarlos en un portaobjetos y mezclarlos con 1-2 gotas de lugol, colocar el cubreobjetos.

MÉTODO C.P.S. DIRECTO O EN FRESCO

I.- INTRODUCCIÓN
Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Antoni Van Leeuwenhoek y a mediados del siglo XVII fue el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoitos de Giardia lamblia.
El método que necesita menos equipo y el más sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces frescas o no preservadas, los exámenes ordinarios se hacen con solución salina isotódica y lugol. Si se emplean heces preservadas, el formol sirve de diluyente.
Las preparaciones no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos; como trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos. El lugol se enplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas, con base a sus características.
La mezcla normal en el tracto intestinal por lo general no asegura una distribución uniforme de trofozoitos de protozoarios móviles, huevos de helmintos y larvas de nematodos. Sin embargo el examen de materia fecal directo o en fresco puede revelar o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la infección.

II.- FUNDAMENTO
La solución salina isotónica da las condiciones adecuadas para que la célula se mantenga viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que puede encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo, es la solución salina fisiológica, y el lugol en la práctica ha demostrado su eficacia para la tinción e identificación de parásitos intestinales.

III.- MATERIAL
-Muestra fecal
-Aplicadores de madera
-Portaobjetos de 25 X 76 mm.
-Cubreobjetos
-Solución salina isotónica
-Lugol parasitológico

IV.- TÉCNICA
-En un portaojetos colocar una gota de solución salina isotónica.
-Con la punta del aplicador tomar una pequeña muestra de aproximadamente 1 a 4 mg. de heces, en muestras con moco y sangre elegir ésta parte para estudiar.
-Mezclar, procurando hacer una suspensión en preparación delgada y no un frotis.
-Quitar de la suspensión fibras y otros fragmentos grandes.
-Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar buebujas.
-Examinar al microscopio en forma sistemática, a seco débil y a aeco fuerte.
-Repetir la operación con una gota de lugol en lugar de la solución salina.

     FORMA DE REPORTAR
Primero se escribe la fase o estado y enseguida el nombre del parásito, con el genérico iniciando con mayúscula y el específico con minúscula, subrayándolo o escribiéndolo con otro tipo de letra.
Por ejemplo:
Huevos de Ascaris lumbricoides.

V.- VENTAJAS Y DESVENTAJAS
A) Ventajas
- La sencillez y rapidez para llevar a cabo éste método, además de la economía en su realización.
-Ambos tipos de montaje se pueden preparar en un mismo portaobjetos.
-Ésta técnica es la más útil para encontrar los trofozoitos de amibas y flagelados.
-Permite observar la movilidad de los organismos, la cual con mucha frecuencia es característica y sirve para hacer identificación exacta.
B) Desventajas.
-Las preparaciones con lugol, pueden destruir las formas sensibles como los trofozoitos.
-La muestra utilizada es tan pequeña que es poco representativa.

VI.- PRECAUCIONES.
-Una preparación satisfactoria debe tener densidad ligeramente opaca, pero ser lo bastante delgada para permitir leer las letras a través de ésta.
-Se deben ver perfectamente los elementos en la preparación, sin que se dificulte la observación por el exceso de burbujas y detritos microscópicos.
-En heces líquidas y semilíquidas hay que seleccionar el moco sanguinolento o los esfácelos delgados del tejido y en heces formadas, hacer raspados para obtener material de la superficie en varias partes de la masa fecal.
-Utilizar intensidad lumínica baja.
-Examinar por lo menos tres muestras antes de considerar negativos los resultados.
-La materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se deberá tener los cuidados necesarios para su manejo.

OBSERVACIONES.
Éstos fue lo que observamos:
-En la muestra 1 (yodo): Fibras vegetales, almidón y bacilos.
-Muestra 1 (solución salina): Fibras transparentes.
-Muestra 2 (yodo): Fibras vegetales.
-Muestra 2 (solución salina): Fibras musculares digeridas y no digeridas, además de restos de fibras de carne.