Grupo sanguíneo y Rh

Determinación de aglutinógenos (tipado globular)

 

Principio: En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos llamados antígenos que representan los llamados grupos o factores sanguíneos.

 

Se sabe que estos complejos químicos se han generado de una sustancia precursora, llamada sustancia H (humana). Sobre esta sustancia se adhieren carbohidratos en un orden determinado. Para la sangre de tipo cero "O"  se unen dos moléculas de galactosa, una de mucosa, una de glucosa y una de glucosamina.

 

Sobre esta cadena puede adherirse una nueva molécula y se cambia el tipo, si es de glucosamina se tiene el grupo "A" y si es de galactosa se tiene el grupo "B". Si se unen ambas moléculas en diversa posición se tiene el grupo "AB".

 

Los primeros grupos sanguíneos que se descubrieron fueron los llamados "ABO" y actualmente se conocen muchos más.

 

El sistema Rh es independiente del sistema ABO, pero igual de importante en la tipificación sanguínea.

 

Hay antígenos presentes en los eritrocitos de casi todas las personas y se les llama Universales, otros antígenos se han concentrado en una sola familia y se les llama Familiares y se han concentrado algunos otros que pertenecen solamente a un individuo y se les llama Personales.

 

La importancia de la determinación de los grupos sanguíneos y Rh en el laboratorio es en las transfusiones sanguíneas y en la eritroblastosis fetal.

 

Factor Rh

 

Introducción: Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, éstas características son los antígenos (Aglutinógenos) y los anticuerpos (Aglutininas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones .

 

 

Material y reactivos

• 1 Placa de vidrio excavada
• 10 Aplicadores de madera
• Lanceta estéril
• Suero Anti A
• Suero Anti B
• Suero Anti D

 

Procedimiento

 

1. Se utiliza la punción cutánea por medio de la lanceta.
   

   
2. Se desecha la primera gota.
3. Se deposita una gota en cada una de las excavaciones de la placa.
   

   
4. Se añade una gota de suero Anti A, Anti B y Anti D respectivamente.
   

   
5. Mezclar perfectamente con el aplicador cada preparación (no contaminar las diferentes preparaciones).
6. Agitar suavemente la placa con movimientos circulares durante 30 segundos aproximadamente.
   

   
7. Leer el resultado (una aglutinación macroscópica indicará la reacción).
   

    

 

Interpretación

 

Anti A               Anti B               Anti D               El grupo sanguíneo y su Factor será:

 

   +                        -                           +                         A Rh positivo

 

   +                        -                           -                          A Rh negativo

 

   -                         +                          +                         B Rh positivo

 

   -                         +                          -                          B Rh negativo

 

  +                         +                          +                         AB Rh positivo

 

  +                         +                          -                          AB Rh negativo

 

  -                          -                           +                         O Rh positivo

 

  -                          -                           -                           O Rh negativo     

 

 

 

Resultados

 

Paciente 1: A Rh positivo

 

Paciente 2: A Rh positivo

 

 

 

 





Recuento diferencial de leucocitos

Introducción

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de sangre.
Al conocer la proporción de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyético podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.
Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena y en línea.

Material y reactivos

 

• Frotis sanguíneo teñido
• Microscopio
• Aceite de inmersión
• Un contador de células

 

Procedimiento

 







1. Se coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.
    
   
    
    
    
    
    
   
2. Se le agrega una gota de aceite de inmersión y se observa con el objetivo de 100X.
3. Si el recuento se hace en línea se empieza en un borde del frotis hasta el otro borde en línea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4. Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos, y basófilos) según su morfología.
5. Se reportan en % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3).

Valor de referencia

 

                                            ADULTOS                                  NIÑOS

LINFOCITOS                      20 - 55%                                      20 - 50%

 

MONOCITOS                      2 - 6%                                          0 - 9%

 

EOSINÓFILOS                    1 - 5 %                                         0 - 8%

 

BASÓFILOS                        0 - 1%                                          0 - 1 %

 

NEUTRÓFILOS                  45 - 70%                                      20 - 60%

 

BANDAS                             0 - 5%                                           1 - 6%

 

 

RESULTADOS

 

• Linfocitos = 34%
• Monocitos = 4%
• Eosinófilos = 2%
• Basófilos = 1%
• Neutrófilos = 53%
• Bandas = 6%



Conteo de leucocitos

INTRODUCCIÓN:

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el líquido de Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer y se cuenta el número de células en los cuadros indicados.

MATERIAL Y REACTIVOS

1.    Pipeta de thoma para glóbulos blancos.

2.    Una cámara de Neubauer.

3.    Un microscopio.

4.    Solución de Turk.

5.    Gasas.

6.    Sangre venosa con EDTA.

PROCEDIMIENTO

1.    Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente. 

2.    Aspirar sangre con la pipeta de thoma hasta la marca. 

3.    Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4.    Aspirar líquido de Turk hasta la marca.

5.    Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.

6.    Agitar la pipeta de thoma de 3 a 5 min, y preparar la cámara de Neubauer con el cubrehematimetro.

7.    Descartar las 3 primeras gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematimetro, sin que se deformen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.

8.    Dejar reposar de 3 a5 min, la cámara con la muestra dentro de una caja Petri con un paño húmedo.

9.    Enfocar la cámara en el microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las 4 cuadriculas de los extremos. 

10- Multiplicar el número de leucocitos contados por 50.

VALOR DE REFERENCIA:

5,000 A 10,000/mm3

RESULTADOS

1-    WBC =  5853/mm3 

2-    WBC =  7150/mm3

Reticulocitos

Objetivo

Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos.

Introducción

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes y contienen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahí su nombre) mediante un colorante supravital.

Cuando en la médula ósea aumenta la eritropoyesis, aumenta también el nñumero de reticulocitos que salen hacia la circulación.

Material, reactivos y equipo

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno
• Tubos de ensaye
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur allo corto con bulbo
• Baño maria
• Microscopio
• Aceite de inmersión

Procedimiento

1.- Mezclar la muestra sanguínea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.

2.- Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta pasteur y mezclar.

3.- Incubar el tubo de ensaye a 37 C durante 15 minutos en el baño maria.

4.- Mezclar la suspensión y realizar un frotis en portaobjetos.

5.- Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersión y observar con el  objetivo 100X.

6.- Buscar células que presenten una red con coloración azul (reticulocitos). Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el número de reticulocitos observados.

Resultados

Número de reticulocitos observados x 100

___________________________________

Número total de eritrocitos

Valor de referencia

Adultos: 0.5 - 2.0 %

Recién nacidos: 2.5 - 6.5 %

Muestra 1: 1.3%

ÍNDICES ERITROCITARIOS (VALORES ABSOLUTOS)

(Valor Hto %)(10)                        
_______________  = V.C.C en M3
No. de eritrocitos / l    VALORES NORMALES
                                      82-92 M3

Sustitución

(46%)(10)        460
_________ = ______ = 88.8 M3 (valor normal)
5,180,000       5.18 / l

  

(Hb en gr/dl)(10)
_____________ = H.C.M. en pg
No. eritrocitos/l      VALORES NORMALES
                                 28-32 pg
Sustitución

(15.28)(10)
_________ = 29.49 pg (valor normal)
5.18 / l


  

  

(Hb en gr/dl)(10)
_____________ = C.H.C.M. en %
Valor Hto %           VALORES NORMALES
                                32-36%
Sustitución

(15.28)(10)
_________ = 33.21 % (valor normal)
     46%

Hematocrito

INTRODUCCIÓN

El hematocrito es el volúmen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguínea y se expresa en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un método sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar por 2 métodos:

1.- MACROMÉTODO (WINTROBE)

2.- MICROMÉTODO

MATERIAL Y REACTIVOS

• Tubo de Wintrobe                                    - Sangre venosa
• Tubo capilar
• Plastilina
• Centrifuga
• Microcentrifuga
• Pipeta Pasteur tallo largo
• Equipo para venopunción
• Lector para hematocrito o regla

TÉCNICA (MACROMÉTODO)

1. Mezclar la muestra sanguínea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma.                                                                                 
2. El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguínea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3000 rpm.                                                               
3. Se efectúa la lectura.

TÉCNICA (MICROMÉTODO)

1.- Mezclar la muestra sanguínea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta 3/4 partes. 

2.- El extremo vacío que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor. 

3.- El tubo con la muestra sanguínea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 rpm. durante 10 minutos.

4.- Leer el porcentaje de hematocrito en el lector o medirlo con una regla. 

VALORES NORMALES

Hombres: 42% - 52%

Mueres: 37% - 47%

RESULTADOS

Muestra 1: 

Macrométodo: 65%

Micrométodo: 47%

Muestra 2:

Macrométodo: 44%

Micrométodo: 43%

Determinación de hemoglobina

Objetivo:

Determinar cuantos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante.

                                                                   Fundamento

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxigeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del del color rojo de la hemoglobina (hb).La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena mas la ε que esta presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:Hemoglobina A: consat de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas del 95% del total.Hemoglobina A´: consat de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción menor de 3%.Hemoglobina F (fetal): consa de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene mayor afinaidad por el oxigeno.Hemoglobina Gower: consa de 2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.Algunos datos se obtiene exmainando a simple vista una muestra de sangre. Un aspecto normal del suero o del plasma revela que el pigmento esta en los glóbulos rojos. Si se agita en una sangre total normal en el aire durante 15 min. Adquere un color rojo claro por convertir la Hb en oxihemoglobina.La sangre tiene un color rojo cereza brillante cuando el pigmento es carboxi-hemoglobina en la intoxicación por CO. El color es chocolate en la metahemoglobulemia y la banda malvada en alsulfohemoglobulemia.Las distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina en un espectofotometro. La identificación de difrenetes formas de la Hbcon la determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera sencilla.

                                                          Material y Equipo:

·        Espectrofotómetro.
·          Pipeta de vidrio graduada de 5 mL
·         Pipeta semiautomatizada
·          Tubos de ensaye
·         Cubetas
·         Gradilla

                                                                 Reactivos:

·         EDTA
·         Reactivo Drabkin
·         Ferrocianuro de potasio
·         Cianuro de potasio
·         Bicarbonato de potasio
·         Solución estándar de cianometahemoglobina

                                                            Reactivos biológicos:

·         Sangre venosa con EDTA.

                                                                       Técnica:

1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).

2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).

3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.

4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.

5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

6.  Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un VENENO).

7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se  efectúe la reacción.

8.-Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se llena las cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.

9.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

PARA HACER LA MEDICION DE TRANSMITANCIA HACER EL SIGUIENTE PROCEDIMIENTO:

Medición de Transmitancia:

1.- Encender el Espectrofotómetro 30 minutos antes, después  seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numéricas y oprima <GO TO>.  Aparecerá en la pantalla el valor numérico.

2.-Presione < %T> para Transmitancia. Aparecerá en la pantalla “T”.

3.-Inserte la cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.

4.-Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta. Aparecerá en la pantalla el valor en Transmitancia.

.-

5.-Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y  guárdela).

                                                                    Cálculos:

Hb total = concentración de Hb (gr/ml) x volumen sanguíneo (ml).

En espectofotometro se aplica la siguiente formula:

muestra/ estandar x 15 = Hb                                                        

Valores de referencia:

Mujeres……………………………………... 12 - 16 g/dL

Hombres……………………………………. 14 - 18 g/dL

Resultado

 Paciente: Rosa Guadalupe Zúñiga Gómez: 14 g/dl